復旦大學上海醫(yī)學院醫(yī)學分子病毒學重點實驗室袁正宏課題組,、市公共衛(wèi)生臨床中心科研人員等合力攻關(guān),，通過長期研究，揭示了乙肝長期遷延不愈的根本原因，同時監(jiān)測到慢性乙肝抗病毒治療后cccDNA清除情況,。相關(guān)研究在線發(fā)表在國際期刊上。

乙肝病毒是嚴重影響人類健康的病原體,，它是造成慢性乙肝的元兇,。世界衛(wèi)生組織2015年的研究估計，全球約有2.4億慢性乙肝患者,，大多分布在低收入,、中等收入國家。每年約有65萬人死于慢性乙肝感染所致的肝衰竭,、肝硬化,、肝細胞癌。我國現(xiàn)有慢性乙肝感染者9300萬人,，在肝硬化,、肝細胞癌患者中，由乙肝病毒引起的比例分別高達60%,、80%,。隨著我國乙肝疫苗接種的推行，嬰幼兒乙肝陽性率大幅降低,。但對其他感染病毒者,，仍缺乏徹底治愈方法，為家庭造成沉重的經(jīng)濟和健康負擔。

論文第一作者,、市公衛(wèi)中心科學研究部博士張小楠介紹,，大量臨床與基礎(chǔ)研究表明，慢性乙肝長期遷延不愈,，根本原因在于乙肝病毒共價閉合環(huán)狀DNA（簡稱cccDNA）在肝內(nèi)長期存在,，繼而導致病毒表面抗原血癥。由于cccDNA在患者體內(nèi)水平極低,，傳統(tǒng)的分子生物學方法不僅檢測困難,，而且無法顯示其組織內(nèi)的分布特點。

在袁正宏指導下,，張小楠在bDNA信號擴增技術(shù)基礎(chǔ)上二次開發(fā),，成功建立了一種能在組織水平顯示cccDNA分布的原位雜交技術(shù)。該技術(shù)同時可顯示乙肝病毒的其他復制中間體,。研究組將原位雜交,、乙肝病毒主要抗原的免疫組織化學染色結(jié)合，獲得了病毒核酸與蛋白質(zhì)的綜合圖像,。令人意外的是,，乙肝病毒抗原與核酸在單細胞水平均呈現(xiàn)驚人的“馬賽克狀”分布，即病毒的cccDNA,。研究進一步證實,，經(jīng)過1年以上抗病毒治療的患者，肝細胞內(nèi)仍存在乙肝病毒cccDNA,。

研究組于是提出：在單細胞水平乙肝病毒存在“抗原富集期”“DNA富集期”和“潛伏期”的三階段假說,，推測患者體內(nèi)肝細胞生理水平、病毒復制活躍度的變化可以導致三個階段的相互轉(zhuǎn)換,。這一假說在單細胞水平描述了病毒生活周期的復雜變化模式,，為進一步針對患者不同病情設計清除乙肝病毒cccDNA提供理論基礎(chǔ)。